Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам

q добавление 4% NaCl в агар с оксациллином (pH 7,2–7,4, так как при более низком pH увеличивается число ложноотрицательных результатов);

q температура инкубации 35oС;

q длительность инкубации 24 ч для S.aureus и 48 ч – для коагулазоотрицательных стафилококков;

q стандартизированное число микроорганизмов.

МИКРООРГАНИЗМ

Чистая культура Staphylococcus spp., инкубированная в течение 18–24 ч на кровяном агаре.

МАТЕРИАЛЫ

  1. Агар Мюллера–Хинтон с добавлением 4% NaCl (4 г на 100 мл среды) и 6 мг/л оксациллина (0,6 мг на 100 мл среды). Агар Мюллера–Хинтон хранится при температуре 2–8oС, готовится согласно прописи на этикетке, 4% NaCl добавляется до автоклавирования.
  2. Субстанция оксациллина с известной активностью предварительно растворяется в стерильной дистиллированной воде (расчет концентрации оксациллина проводят с учетом его активности) и добавляется в охлажденный на водяной бане до 48 –50oС агар Мюллера –Хинтон. Приготовленный агар разливается по чашкам с толщиной слоя 3–4 мм (на чашку диаметром 100 мм – 25 мл). Готовые чашки со средой хранятся в пластиковых пакетах при температуре 4 –8oС не более 5 сут.
  3. Для контроля роста необходимо также приготовить чашки с агаром, содержащим 4% NaCl, но без антибиотика.
  4. Кровяной агар с чистой культурой стафилококка, инкубированной в течение 18 –24 ч.
  5. Стерильный физиологический раствор.
  6. Стандарт мутности 0,5 по Мак-Фарланду.
  7. Стерильные тампоны или микропипетка (10 мкл).
  8. Термостат с температурой инкубирования 35oС.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Исследование проводят при обязательном контроле роста испытуемых культур на агаре Мюллера–Хинтон с 4% NaCl без оксациллина (культуру наносят так же, как на агар с оксациллином).

Контрольные штаммы:

S.aureus ATCC 38591 – резистентный;

S.aureus ATCC 29213 – чувствительный.

ПОСТАНОВКА ТЕСТА

Приготовление инокулюма. Бактериальную взвесь стафилококка готовят из нескольких колоний с одинаковой морфологией на стерильном физиологическом растворе (3 мл) и доводят до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5·108 КОЕ/мл).

Инокуляция. Метод I (микропипеткой):

  1. приготовить разведение 1:100 стандартного инокулюма 0,5 по Мак-Фарланду для получения бактериальной взвеси, содержащей 1,5·106 КОЕ/мл (например, добавить 0,1 мл стандартной суспензии к 9,9 мл стерильного физиологического раствора);
  2. с помощью микропипетки нанести каплю (10 мкл) разведенной стандартной суспензии на поверхность агара с оксацил лином.

Метод II (с помощью тампона ):

  1. погрузить стерильный ватный тампон в пробирку со стандартизированной суспензией (0,5 по Мак-Фарланду), затем отжать избыток влаги о стенку пробирки;
  2. коснуться тампоном поверхности агара с оксациллином.

ИНКУБАЦИЯ. Штаммы S.aureus инкубируются при температуре 35oС в течение полных 24 ч, а коагулаза(–) стафилококков – в течение 48 ч.

Перейти на страницу: 1 2 3 4

Узнайте немного больше

Эмбриология человека
Эмбриология человека, изучение развития человеческого организма от момента образования одноклеточной зиготы, или оплодотворенного яйцеклетки, до рождения ребенка. Эмбриональное (внутриутробное) развитие человека длится примерно 265–270 дней. В течение этого времени из ...

Любовь с последствиями и без
Несмотря на то, что современная медицина развивается стремительными темпами и многие заболевания, которые она до недавнего времени или не выявляла вовсе, или не считала опасными, уже обрели в глазах медиков конкретные очертания в виде их возбудителей и последствий для ...