Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам
q добавление 4% NaCl в агар с оксациллином (pH 7,2–7,4, так как при более низком pH увеличивается число ложноотрицательных результатов);
q температура инкубации 35oС;
q длительность инкубации 24 ч для S.aureus и 48 ч – для коагулазоотрицательных стафилококков;
q стандартизированное число микроорганизмов.
МИКРООРГАНИЗМ
Чистая культура Staphylococcus spp., инкубированная в течение 18–24 ч на кровяном агаре.
МАТЕРИАЛЫ
- Агар Мюллера–Хинтон с добавлением 4% NaCl (4 г на 100 мл среды) и 6 мг/л оксациллина (0,6 мг на 100 мл среды). Агар Мюллера–Хинтон хранится при температуре 2–8oС, готовится согласно прописи на этикетке, 4% NaCl добавляется до автоклавирования.
- Субстанция оксациллина с известной активностью предварительно растворяется в стерильной дистиллированной воде (расчет концентрации оксациллина проводят с учетом его активности) и добавляется в охлажденный на водяной бане до 48 –50oС агар Мюллера –Хинтон. Приготовленный агар разливается по чашкам с толщиной слоя 3–4 мм (на чашку диаметром 100 мм – 25 мл). Готовые чашки со средой хранятся в пластиковых пакетах при температуре 4 –8oС не более 5 сут.
- Для контроля роста необходимо также приготовить чашки с агаром, содержащим 4% NaCl, но без антибиотика.
- Кровяной агар с чистой культурой стафилококка, инкубированной в течение 18 –24 ч.
- Стерильный физиологический раствор.
- Стандарт мутности 0,5 по Мак-Фарланду.
- Стерильные тампоны или микропипетка (10 мкл).
- Термостат с температурой инкубирования 35oС.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Исследование проводят при обязательном контроле роста испытуемых культур на агаре Мюллера–Хинтон с 4% NaCl без оксациллина (культуру наносят так же, как на агар с оксациллином).
Контрольные штаммы:
S.aureus ATCC 38591 – резистентный;
S.aureus ATCC 29213 – чувствительный.
ПОСТАНОВКА ТЕСТА
Приготовление инокулюма. Бактериальную взвесь стафилококка готовят из нескольких колоний с одинаковой морфологией на стерильном физиологическом растворе (3 мл) и доводят до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5·108 КОЕ/мл).
Инокуляция. Метод I (микропипеткой):
- приготовить разведение 1:100 стандартного инокулюма 0,5 по Мак-Фарланду для получения бактериальной взвеси, содержащей 1,5·106 КОЕ/мл (например, добавить 0,1 мл стандартной суспензии к 9,9 мл стерильного физиологического раствора);
- с помощью микропипетки нанести каплю (10 мкл) разведенной стандартной суспензии на поверхность агара с оксацил лином.
Метод II (с помощью тампона ):
- погрузить стерильный ватный тампон в пробирку со стандартизированной суспензией (0,5 по Мак-Фарланду), затем отжать избыток влаги о стенку пробирки;
- коснуться тампоном поверхности агара с оксациллином.
ИНКУБАЦИЯ. Штаммы S.aureus инкубируются при температуре 35oС в течение полных 24 ч, а коагулаза(–) стафилококков – в течение 48 ч.
Узнайте немного больше
Мочекаменная болезнь. Почечная колика.
Мочекаменная
болезнь - Заболевание, основным патогенетическим звеном которого является
образование мочевых камней в органах мочевыделительной системы. Другое название
мочекаменной болезни - уролитиаз. Наблюдается некоторое преобладание женщин
среди больных мочекаменно ...
История развития судебной медицины в России и за рубежом.
Медицинские знания применялись при осуществлении
правосудия уже в древности. Так, ещё Гиппократ изучал такие вопросы, как
установление аборта и срока беременности, жизнеспособности недоношенных
младенцев, тяжести и смертельности различных повреждений и др. Уже в те времена
в ...